采用 Cary 8454 和 Cary 60 紫外-可見 分光光度計

進行測定的比較

前言

方法開發和驗證用于證明所有新儀器在現有儀器的操作范圍和可接受標準內，能夠 提供相同的結果。將方法從一臺儀器轉移至另一臺儀器時，驗證要求取決于 GMP 指 南，來確保結果的一致性和重現性。

本研究展示了在使用紫外-可見 ChemStation 軟件的 Cary 8454 紫外-可見分光光度計 與使用 Cary WinUV 軟件的 Cary 60 紫外-可見分光光度計之間的方法轉移。同時通過 對比證明了兩種分光光度計系統結果的準確性和重現性。方法的任何其他驗證要求 均需要滿足法規指南和可接受標準。

實驗部分

設備

–     Cary 8454 紫外-可見分光光度計

–     紫外-可見 ChemStation 軟件

–     Cary 60 紫外-可見分光光度計

–     Cary WinUV 軟件

試劑

–      空白溶液：    0.00 mg/L 高氯酸空白

–      標準溶液：    40 mg/L、80 mg/L 和 120 mg/L 重鉻酸鉀

–      樣品溶液：    約 75 mg/L 重鉻酸鉀

第 1 部分：確定分析波長

使用 40 mg/L 的重鉻酸鉀樣品確定合適的波長，并使用 Cary  8454 和 Cary 60 紫外-可見分光光度計在該波長下生成校準曲線。

儀器參數：Cary 8454

–      ChemStation 軟件：    標準模式，光譜/峰任務

–      波長顯示：                  200–800 nm

–      積分時間：                 0.5 秒

–      峰/峰谷查找：             查找并標注最多兩個峰

儀器參數：Cary 60

–      WinUV 軟件：             “掃描"應用程序

–      波長顯示：                  200–800 nm

–      掃描速度：                  高級設置：數據間隔 3 nm

–      基線：                        所選校正

–      峰信息：                      峰閾值 0.010 ，X 標注（圖 1）

圖 1. 在 Cary WinUV 設置菜單中設置峰標注

方法

開啟 Cary 8454 紫外-可見分光光度計，將燈預熱一小時。在 預熱過程中，打開紫外-可見 ChemStation 軟件，選擇“標準 模式"進行分析并輸入參數。預熱后，使用高氯酸空白進行空 白讀數。使用 40 mg/L 高氯酸溶液采集單個光譜， 從而確定 分析波長。

Cary 60 紫外-可見分光光度計不需要預熱。打開 Cary WinUV 軟件，選擇“掃描"應用程序并輸入參數。使用高氯酸空白進 行基線采集，然后采集 40 mg/L 重鉻酸鉀溶液的掃描結果。

結果

在 Cary 8454 紫外-可見分光光度計和 Cary 60 分光光度計上采 集的重鉻酸鉀譜圖具有高度重現性，且在 257 nm 和 350 nm 處鑒定出了相同的峰（圖 2a 和 2b）。

圖 2a. 展示重鉻酸鉀光譜的紫外-可見 ChemStation 軟件，圖中在 257 nm 和

350 nm 處鑒定出兩個峰。采集自 Cary 8454 紫外-可見分光光度計

圖 2b. 展示重鉻酸鉀光譜的 Cary WinUV 軟件，圖中在 257 nm 和 350 nm 處 鑒定出兩個峰。采集自 Cary 60 分光光度計

第 2 部分：確定未知樣品濃度

在 Cary 8454 紫外-可見分光光度計和 Cary 60 中使用三種重 鉻酸鉀標準溶液生成校準曲線。選擇的分析波長為 350 nm。

儀器參數：Cary 8454（圖 3）

–      ChemStation 軟件：      標準模式，定量分析任務

–      波長：                           350 nm

–      背景校正：                    無

–      校準曲線類型：            線性

–      重量：                           單位為 mg/L 與體積校正

–      提示：                          用于標準品和樣品信息

圖 3. 紫外-可見 ChemStation 標準模式定量分析任務中的方法參數

儀器參數：Cary 60（圖 4）

–      WinUV 軟件：      “濃度"應用程序

–      波長：                 350 nm

–      標準品設置：       單位為 mg/L ，3 種標準品，線性擬合

–      重復次數：           2 次

圖 4. Cary WinUV“濃度"應用程序設置菜單中的方法參數

方法

在兩種儀器中均使用高氯酸空白進行空白讀數。對 40 mg/L、 80 mg/L 和 120 mg/L 高氯酸溶液進行單次測定，生成校準曲 線。然后對未知樣品進行測定。

結果

根據生成的一條校準曲線，使用 Cary 8454 紫外-可見分光光 度計測定的未知重鉻酸鉀溶液的濃度為 77.5 mg/L（圖 5）， 使用 Cary 60 測定的濃度為 77.4 mg/L（圖 6），表明兩種系統 能夠獲得相當的結果。

圖 5. 展示樣品/結果表的紫外-可見 ChemStation 軟件，其中未知重鉻酸鉀樣品 濃度為 77.5 mg/L

圖 6. Cary WinUV 軟件濃度應用程序分析報告，展示重鉻酸鉀未知樣品（樣品 1） 的濃度為 77.4 mg/L

結論

Cary 8454 紫外-可見分光光度計和 Cary 60 系統均分析快速且 簡單易用。如本研究所示，兩種系統均有可輕松進行方法開發 的軟件，能夠實現常規紫外-可見方法的快速設置。

從 Cary 8454 紫外-可見分光光度計到 Cary 60 紫外-可見分光 光度計的兩種方法的轉移結果證明，可實現重現性峰采集以及 準確的標準品和樣品測定。

本研究分析結果表明，Cary 60 紫外-可見分光光度計（也支持 可選的 21 CFR Part 11 軟件工具）的性能，可確保法規 監管實驗室在使用 Cary 60 執行之前為 8453 或 8454 儀器開 發的方法時充滿信心。